《生化危机5：惩罚》在继前几部，保护伞公司研发的T病毒持续侵袭地球，仅存的人类被逼到面临人吃人的绝境。人类唯一的希望全在生化人爱丽丝身上，当她从保护伞公司的秘密实验室里苏醒后，跑遍东京、纽约、华盛顿和莫斯科四地，试图追出散播病毒的凶手。
　　没想到，一连串的意外让爱丽丝面临真假难辨的困境，在昔日伙伴和新盟友艾达的加入下，艾莉丝该如何在天谴大限来临前找出生路，带领人类度过末日危机？
　 　影片设定在1998年，影片不再是只把焦点集中在爱丽丝这个角色身上，吉尔将在由安布雷拉（Umbrella）制造的僵尸潮的爆发中扮演重要角色。里 昂·肯尼迪（Leon Kennedy）也将入主，尽管该角色当时在电影《生化危机2：启示录》剧情中透露其已经死亡，但安德森应该会设法自圆其说；在《生化危机4》电影中就有 大量来自游戏第五代的boss，所以这次再把游戏第四代的第一男主角里昂带入电影版《生化5》也算情理之中。